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皮膚敏化（過敏）是皮膚暴露安全性評估中最難評測的一個端點。過敏是一個非常復雜的反應，通常涉及到人體血液和免疫系統。過敏反應難以預測，且可能與其他器官（如肺和消化系統）交叉反應。過敏反應可能是化妝品不良反應中唯一一個可以快速導致死亡的情形。護膚品是有可能導致過敏癥的，盡管這種案例比較少見。西方人種護膚品過敏表現持續上升的事實更凸顯了護膚品安全性評估的重要性。據日本國立保健科學研究院2014年的報道，在2009 年的一個案例中，兩名病人一開始對洗臉皂中的水解小麥蛋白（HWP）發生過敏反應，隨后在攝入小麥產品后發生嚴重的小麥依賴運動誘發過敏反應（WDEIA）。該研究院指出，從2009年截至2013年6月20日，從各類機構有超過1900名病人報告了此類過敏反應。重要的是，大部分病人使用了同樣的洗臉皂（Cha no Shizuku，日本一洗臉皂品牌），該洗臉皂含酸水解小麥蛋白（Acid-HWP）。洗臉皂中的商業用酸水解蛋白（Glupearl 19S）是從面筋中提取的，平均分子質量為30~50kDa。
也許對小麥相關產品的過敏并不罕見，但是日本另一個報道將過敏源指向了一個我們認為并不有害的化合物：聚乙二醇同源化合物。土耳其的另一篇文章描述了嬰兒對古龍香水嚴重過敏的現象，這名嬰兒在其母親將古龍香水涂于其面部后發生了過敏反應。這名本該健健康康兩個月大的嬰兒因為面部浮腫和呼吸短促被送進急救室。這名嬰兒接受了一系列藥物治療，在癥狀消退后出院。
最后一個引人關注的過敏案例發生在西班牙。2010年，一位42歲的婦女在身體和面部使用一系列化妝品后，被發現對2-苯氧乙醇這種防腐劑過敏。在一次往手臂和腿上涂抹潤膚霜之后，這位婦女立即發生蕁麻疹并繼而發生眩暈。一項在手前臂上的公開測試確認防腐劑苯氧乙醇會立刻導致陽性反應。
過敏反應分類
皮膚過敏反應可以大致分為即時過敏和延遲過敏。即時過敏反應與真皮中的肥大細胞的激活有關。這種激活可以通過抗體來緩解，通常若先前發生過一次皮膚接觸或直接細胞暴露即可產生抗體。延遲過敏反應與淋巴系統中的T 細胞激活有關。這種激活也可以通過抗體來緩解。即時過敏反應也被稱之為“1型”過敏反應或蕁麻疹，延遲過敏反應也被稱之為“4型”過敏反應。臨床暴露試驗，即人體重復激發斑貼試驗（RIPT）被廣泛應用于測試原料和配方的安全性。但該試驗并不評估即時過敏反應，只涉及延遲過敏。除了一些學術機構的基礎研究試驗和臨床皮膚點刺試驗（用一根包含少量被測試過敏原的針刺入皮膚），目前尚無“1型”過敏反應的商業試驗?；瘖y品的原料和配方通常也不經過這種測評。
在評估潛在致敏性時需要考慮一些前提條件。若要誘發此類反應，過敏原需要充分穿透角質層，并與皮膚中的載運蛋白發生反應。因此，只有充分暴露在過敏原中且個體具備免疫特異性時才會發生該過敏反應。
一種針對“4 型”過敏反應的評測叫做ARE-Nrf2熒光素酶測試法（使用角質細胞作為測試系統的方法），該方法基于Keap1-Nrf2-ARE通路。這些通路與氧化應激下的細胞保護反應，以及皮膚過敏的細胞過程有關。這種試驗利用選擇性質粒轉染的HaCaT不衰人體角質形成細胞系來量化熒光素酶基因的誘導作用，以衡量ARE通路。Keap1 是一種傳感蛋白，包含高活性可反應半胱氨酸，而不是賴氨酸。它作用于轉錄因子Nrf2，Nrf2對過敏的表達至關重要，且是過敏原誘導干擾素INF-γ形成的條件。因為致敏物質可能在皮膚蛋白反應中對賴氨酸或半胱氨酸發生反應，所以務請注意只對賴氨酸反應的潛在致敏物質不會誘發Keap1 通路，從而不在該試驗中被鑒定。與賴氨酸通道相關的介質還需要進一步研究。
OECD針對ARE-Nrf2熒光素酶測試法的指導方針（編號442D）在2015年2月5日發布。該試驗基于皮膚致敏物質可能對傳感蛋白Keap1 發生反應，然后通過共價結合進而改變Keap1的結構使其與轉錄因子Nrf2分離。被分離的轉錄因子Nrf2能夠在ARE依賴基因的激活中發生作用。該測試方法的一個優勢是能夠自弱到強劃分潛在致敏物質。通過此種方法鑒定的致敏物如：肉桂醇和肉桂醛等弱致敏物；2-巰基苯并噻唑等中度致敏物；甲基二溴戊二腈等強致敏物。
另一個相對簡單、快速和低成本的測定皮膚敏化作用的試驗方法是直接肽反應試驗法（DPRA）。該試驗方法基于如下認識：為了激發大量免疫反應以產生抗體，致敏化合物或分子中的致敏核心成分必須與載體蛋白相結合。這個過程被稱為半抗原化，致敏化學物被稱為半抗原。DPRA 通過模仿致敏化學物在皮膚蛋白親核域的共價結合，能夠量化對于包含半胱氨酸和賴氨酸的模型合成多肽的化學反應。該試驗需要通過包含合成肽的測試化合物的潛伏，合成肽含同一濃度的半胱氨酸或賴氨酸，一式三份持續24小時。分析端點在HPLC/UV分析平臺上進行，通過溶劑對照來量化半胱氨酸和賴氨酸的損耗百分比。DPRA 由OECD在2015年2月5日發布，編號442C。
這兩套離體分析試驗法是現有研究中比較推薦的。這些研究的評估和驗證還處于不同階段。根據基因表達、細胞激活和細胞因子釋放建議做進一步研究。但以上推薦研究中仍然缺少關于反應中肥大細胞作用及真皮中關鍵細胞群在緩解過敏尤其是“1型”即時過敏反應作用的評測。截止目前，沒有任何一個單項試驗可以預測所有可能的皮膚過敏反應，每一種試驗都有其局限性，需要充分認識和考量。因此，在這些測評中需要設計并開展一系列試驗。基于皮膚暴露的風險評定和其他與測試合成物相關的屬性，研究的級別需要做對應的個性化調整。強烈建議建立電子定量構效關系（aSAR）以微調所選試驗方法的結果。
參考文獻：
Kobayashi T et al. Int J Dermatol. 54(8): (2015) e302-5
Yamasuji Y et al. Contact Dermatitis. 69(3): (2013) 183-5
Higashi Y et al. Allergol Immunopathol. 40(3): (2012) 198
Arikan-Ayyildiz Z et al. J Investig Allergol Clin Immunol. 21(6):(2011) 494-5
Nú?ez Orjales R et al. J Investig Allergol Clin Immunol. 20(4):(2010) 354-5
http://www.oecd-ilibrary.org/environment/test-no-442d-in-vitroskin-sensi...
http://www.oecd.org/env/test-no-442c-in-chemico-skinsensitisation-978926...
Natsch A. Tox Sci. 113(2): (2010) 284-92
也許對小麥相關產品的過敏并不罕見，但是日本另一個報道將過敏源指向了一個我們認為并不有害的化合物：聚乙二醇同源化合物。土耳其的另一篇文章描述了嬰兒對古龍香水嚴重過敏的現象，這名嬰兒在其母親將古龍香水涂于其面部后發生了過敏反應。這名本該健健康康兩個月大的嬰兒因為面部浮腫和呼吸短促被送進急救室。這名嬰兒接受了一系列藥物治療，在癥狀消退后出院。
最后一個引人關注的過敏案例發生在西班牙。2010年，一位42歲的婦女在身體和面部使用一系列化妝品后，被發現對2-苯氧乙醇這種防腐劑過敏。在一次往手臂和腿上涂抹潤膚霜之后，這位婦女立即發生蕁麻疹并繼而發生眩暈。一項在手前臂上的公開測試確認防腐劑苯氧乙醇會立刻導致陽性反應。
過敏反應分類
皮膚過敏反應可以大致分為即時過敏和延遲過敏。即時過敏反應與真皮中的肥大細胞的激活有關。這種激活可以通過抗體來緩解，通常若先前發生過一次皮膚接觸或直接細胞暴露即可產生抗體。延遲過敏反應與淋巴系統中的T 細胞激活有關。這種激活也可以通過抗體來緩解。即時過敏反應也被稱之為“1型”過敏反應或蕁麻疹，延遲過敏反應也被稱之為“4型”過敏反應。臨床暴露試驗，即人體重復激發斑貼試驗（RIPT）被廣泛應用于測試原料和配方的安全性。但該試驗并不評估即時過敏反應，只涉及延遲過敏。除了一些學術機構的基礎研究試驗和臨床皮膚點刺試驗（用一根包含少量被測試過敏原的針刺入皮膚），目前尚無“1型”過敏反應的商業試驗?；瘖y品的原料和配方通常也不經過這種測評。
在評估潛在致敏性時需要考慮一些前提條件。若要誘發此類反應，過敏原需要充分穿透角質層，并與皮膚中的載運蛋白發生反應。因此，只有充分暴露在過敏原中且個體具備免疫特異性時才會發生該過敏反應。
一種針對“4 型”過敏反應的評測叫做ARE-Nrf2熒光素酶測試法（使用角質細胞作為測試系統的方法），該方法基于Keap1-Nrf2-ARE通路。這些通路與氧化應激下的細胞保護反應，以及皮膚過敏的細胞過程有關。這種試驗利用選擇性質粒轉染的HaCaT不衰人體角質形成細胞系來量化熒光素酶基因的誘導作用，以衡量ARE通路。Keap1 是一種傳感蛋白，包含高活性可反應半胱氨酸，而不是賴氨酸。它作用于轉錄因子Nrf2，Nrf2對過敏的表達至關重要，且是過敏原誘導干擾素INF-γ形成的條件。因為致敏物質可能在皮膚蛋白反應中對賴氨酸或半胱氨酸發生反應，所以務請注意只對賴氨酸反應的潛在致敏物質不會誘發Keap1 通路，從而不在該試驗中被鑒定。與賴氨酸通道相關的介質還需要進一步研究。
OECD針對ARE-Nrf2熒光素酶測試法的指導方針（編號442D）在2015年2月5日發布。該試驗基于皮膚致敏物質可能對傳感蛋白Keap1 發生反應，然后通過共價結合進而改變Keap1的結構使其與轉錄因子Nrf2分離。被分離的轉錄因子Nrf2能夠在ARE依賴基因的激活中發生作用。該測試方法的一個優勢是能夠自弱到強劃分潛在致敏物質。通過此種方法鑒定的致敏物如：肉桂醇和肉桂醛等弱致敏物；2-巰基苯并噻唑等中度致敏物；甲基二溴戊二腈等強致敏物。
另一個相對簡單、快速和低成本的測定皮膚敏化作用的試驗方法是直接肽反應試驗法（DPRA）。該試驗方法基于如下認識：為了激發大量免疫反應以產生抗體，致敏化合物或分子中的致敏核心成分必須與載體蛋白相結合。這個過程被稱為半抗原化，致敏化學物被稱為半抗原。DPRA 通過模仿致敏化學物在皮膚蛋白親核域的共價結合，能夠量化對于包含半胱氨酸和賴氨酸的模型合成多肽的化學反應。該試驗需要通過包含合成肽的測試化合物的潛伏，合成肽含同一濃度的半胱氨酸或賴氨酸，一式三份持續24小時。分析端點在HPLC/UV分析平臺上進行，通過溶劑對照來量化半胱氨酸和賴氨酸的損耗百分比。DPRA 由OECD在2015年2月5日發布，編號442C。
這兩套離體分析試驗法是現有研究中比較推薦的。這些研究的評估和驗證還處于不同階段。根據基因表達、細胞激活和細胞因子釋放建議做進一步研究。但以上推薦研究中仍然缺少關于反應中肥大細胞作用及真皮中關鍵細胞群在緩解過敏尤其是“1型”即時過敏反應作用的評測。截止目前，沒有任何一個單項試驗可以預測所有可能的皮膚過敏反應，每一種試驗都有其局限性，需要充分認識和考量。因此，在這些測評中需要設計并開展一系列試驗。基于皮膚暴露的風險評定和其他與測試合成物相關的屬性，研究的級別需要做對應的個性化調整。強烈建議建立電子定量構效關系（aSAR）以微調所選試驗方法的結果。
參考文獻：
Kobayashi T et al. Int J Dermatol. 54(8): (2015) e302-5
Yamasuji Y et al. Contact Dermatitis. 69(3): (2013) 183-5
Higashi Y et al. Allergol Immunopathol. 40(3): (2012) 198
Arikan-Ayyildiz Z et al. J Investig Allergol Clin Immunol. 21(6):(2011) 494-5
Nú?ez Orjales R et al. J Investig Allergol Clin Immunol. 20(4):(2010) 354-5
http://www.oecd-ilibrary.org/environment/test-no-442d-in-vitroskin-sensi...
http://www.oecd.org/env/test-no-442c-in-chemico-skinsensitisation-978926...
Natsch A. Tox Sci. 113(2): (2010) 284-92