葡萄籽多酚物質原花青素對肌膚抗衰老的作用及透明感的提升

1. 前言

近年來，植生素（植物由來的化學成分，又稱植物營養素）的概念廣為人知，被認為是繼碳水化合物、蛋白質、脂肪（以上為三大營養素）、礦物質、維生素（以上為五大營養素）和食物纖維（第六大營養素）之后的第七大營養素。多項研究成果顯示植生素在生命體內擔任重要的機能調節作用。

多酚類物質也是一種植生素。絕大多數植物內都含有多酚，它具有抗氧化的功能，在植物內通常作為苦澀成分或色素而蓄積。由于其化學結構中含有多個苯酚羥基，因此而得名。植物為了保護自身不受氧化和光照的傷害，特別是能夠正確的把遺傳信息傳遞給后代，因此在遺傳信息尤為集中的種子部分里含有大量的抗氧化物質。

法國雖是一個有著高脂肪飲食習慣的國家，但事實上法國人的心臟病死亡率遠低于其他歐美各國，這一現象有個為人熟知的名字，叫做“法國悖論”。后來人們發現這一現象與喝紅酒有關，進而經確認紅酒中的多酚可防止LDL膽固醇氧化。在紅酒中的多酚類之中，原花青素是其中的主角，它作為法國悖論的活性之本而受到人們的關注。

2. 葡萄籽多酚“原花青素”

“Gravinol KPA-CU”是一種用精制水從葡萄籽提取多酚，用乙醇調制得到的高純度、高透明度提取物，其主要成分“原花青素”是具有高抗氧化功效的多酚。原花青素除了具有消除活性氧和抗炎癥功效之外，它通過抑制酪氨酸酶活性來抑制黑色素生成和抑制黑色素細胞繁殖的能力也已為人所知。Gravinol KPA-CU還具有強大的抗糖化功效，有望幫助肌膚抗衰老和提升透明感。

Gravinol KPA-CU 集抗氧化、抑制酪氨酸酶活性和抗糖化三大功效于一身，是一種葡萄源安全化妝品原料（圖1）。

圖1. Gravinol KPA-CU 的特點

原花青素是葡萄籽中大量含有的一種多酚類物質，也是多酚類中具有特別強力抗氧化能力的一種代表性成分。圖2 為原花青素及其他抗氧化物質的抗氧化能力的比較。

圖2. 抗氧化能力的比較

3. 抗糖化、抗氧化、抑制酪氨酸酶活性

在女性的肌膚問題之中，“黃褐斑、雀斑”是二大困擾，而受紫外線刺激而產生的活性氧被認為是造成這種問題的一個原因。利用KPACU的抗氧化力和抑制酪氨酸酶活性的功效，對黃褐斑和雀斑有望獲得預防和淡化的效果，進而通過它強大的抗糖化力，有望改善肌膚透明感和彈性，也就是抗衰老效果。

3.1. 抗糖化（抗AGEs 生成活性）

使用人血清白蛋白，對抗AGEs生成活性進行了評價（圖3）。

圖3. 抗糖化（抗AGEs 生成活性）

【試驗方法】

將樣品20 μL 與0.1 M PBS 500 μL、40 mg/mL 人血清白蛋白20 μL、2 M 葡萄糖100 μL 混合在一起，在60℃條件下培養40 小時，然后將溶液200 μL 滴定在多孔板上，在激發波長370 nm、熒光波長440 nm 下進行了熒光測定。對照組使用蒸餾水。設定樣品添加區中的葡萄糖添加組和非添加組的測定值之差為A，蒸餾水添加區中的葡萄糖添加組和非添加組的測定值之差為B，按下式計算得到了抗AGEs生成活性。

抗AGEs 生成活性(%)={1-(A/B)}×100

【考察】

AGEs 為Advanced Glycation End-products 的縮寫，是蛋白質被糖化后的不可還原的產物。人體內AGEs 聚集增多老化現象就會變得明顯，表現在皮膚上的就是暗淡或硬化。在血管內聚集則會導致動脈硬化，也是糖尿病惡化的主要原因。防止AGEs 的生成，是防止老化保持青春活力的關鍵。

AGEs的生成需要通過阿馬道里重排反應及蛋白質的縮合聚合等一系列復雜的過程。我們發現通過在人血清白蛋白及葡萄糖的反應體系里添加0.05%的Gravinol KPA-CU可以抑制AGEs的生成反應。

絕大多數美白原料的作用機理都是有關酪氨酸酶活性的，也有一些同時具有抗氧化能力。但在此基礎上更具有抗糖化（抗AGEs生成活性）效果的Gravinol KPA-CU則可以稱之為無與倫比的美白及抗衰老原料。同一原料可從不同方面同時達到美白效果，可以說是Gravinol KPA-CU的一大優勢。

3.2. 抑制活性氧生成

使用DPPH，對去除DPPH 基團活性進行了評價（圖4）。

圖4. 抑制活性氧生成

【試驗方法】

在樣品40 μL 中加入DPPH溶液，在室溫下反應1小時，然后使用多孔板檢測儀進行了517 nm OD值檢測（DPPH 終止濃度60 μM）。以各樣品的溶解液或稀釋溶液為空白樣，設定樣品添加區中的DPPH 基團添加組和非添加組之差為A，空白樣添加區中的DPPH 基團添加組和非添加組之差為B，按下式計算得到了去除DPPH 基團活性。

去除DPPH 基團活性(%)={1-(A/B)}×100

【考察】

眾所周知，人體內過剩的活性氧等自由基是引發皮膚斑及皺紋、動脈硬化、糖尿病、癌癥及其他各種老化現象的罪魁禍首。自由基的產生和紫外線（日照）、吸煙、身體負擔、藥物化學物質及某些食品的攝取有關。清除這種自由基，是防止各種老化現象的重要的防患于未然的手段。

我們使用DPPH來評價消除自由基的活性。Gravinol KPA-CU在低濃度下就表現出了極強的自由基消除活性。葡萄籽多酚中的原花青素比維生素C、維生素E、兒茶素及沒食子酸更具有強大的抗氧化能力，即使少量添加就可以消除自由基活性，強效抑制會導致皮膚的色素沉積及老化等一系列反應的初期刺激。

3.3. 抑制酪氨酸酶活性

使用蘑菇源酪氨酸酶，對抑制酪氨酸酶活性進行了評價（圖5）。

圖5. 抑制酪氨酸酶活性

【試驗方法】

在樣品20 μL中添加1/15 M Phosphate Bufer（pH6.8）100 μL和40 U/mL蘑菇源酪氨酸酶40 μL，混合后添加2.5 mM L-DOPA 50 μL，反應15 分鐘后，使用多孔板檢測儀進行了490nm 吸光度測定。以各樣品的溶解液或稀釋溶液為空白樣，設定樣品添加區中的L-DOPA添加組和非添加組的測定值之差為A，以空白樣添加區中的L-DOPA添加組和非添加組的測定值之差為B，按下式計算得到了被抑制的酪氨酸酶活性。

抑制酪氨酸酶活性(%)={1-(A/B)}×100

3.4. 以左旋多巴為基質的抗酪氨酸酶活性

【試驗方法】

將樣品1mL、1/15 M磷酸緩沖液5mL和40U/mL酪氨酸酶溶液2mL混合在一起，靜置5分鐘以上，然后添加2.5mM左旋多巴溶液2.5mL，對10～20分鐘后的著色進行了確認（圖6）。

圖6. 以左旋多巴為基質的抗酪氨酸酶活性

【考察】

皮膚的暗淡及雀斑等色素沉積的原因是黑色素在角化細胞的聚集，而酪氨酸酶是黑色素生成的關鍵所在。體內氨基酸的酪氨酸在酪氨酸酶的作用下經多巴、多巴醌最終作為黑色素排出、聚集。抑制了酪氨酸酶的活性便可以有效抑制黑色素的形成，因此具有抑制酪氨酸酶活性的曲酸、鞣花酸及熊果苷等物質被廣泛用做美白劑使用。

Gravinol KPA-CU對酪氨酸酶活性的抑制和其濃度成正比。已有研究證實，原花青素的聚合度越高其抑制黑色素活性越強，那么由此可以認為含有大量高重合度的Gravinol KPA-CU對抑制酪氨酸酶活性有卓越的效果。

4. 產品概況

性狀　          褐色～紅褐色透明液體

pH　　          3.5 ～ 5.0

乙醇含量       25 ～ 35　vol％

固態成分濃度 10 ～ 15％

總黃烷醇含量 5％以上

建議配比　   0.01 ～ 1％

已按照藥妝品標準（外原規）附頁標準取得使用先例?？捎米魉帄y品。